โปรตีนที่มีฤทธ์ิยับยั้งเอนไซม์ HIV-1 reversetranscriptase ของพุทธรักษา |
| โดย: นายกฤษณ์ สรวมชีพ,นายกฤษณภัชฏ์ จิตจักร ปีการศึกษา: 2555 กลุ่มที่: 8 อาจารย์ที่ปรึกษา: จันทร์เพ็ญ วิวัฒน์ , วงศ์สถิตย์ ฉั่วกุล ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: ยับยั้งเอนไซน์ HIV-I reverse transcriptase, พุทธรักษา, โปรตีน, Canna indica.L., Anti HIV-I reverse transcriptase, Canna indica L , Protein |
| บทคัดย่อ: โครงการพิเศษนี้จัดทำเพื่อหาโปรตีนที่มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซน์ HIV-1reverse transcriptase ในหลอดทดลอง โดยใช้วิธี Colorimetric นำสารสกัดน้ำจากส่วนเหง้าและใบสดของพุทธรักษา(Canna indica.L.) มาตกตะกอนโดยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้มข้นต่างๆ พบว่าเมื่อสารสกัดโปรตีนจากส่วนเหง้า ผ่านการแยกให้บริสุทธิ์โดยวิธี Native gel electrophoresis มีแถบโปรตีนที่สนใจซึ่งเป็นโปรตีนเชิงซ้อนที่ประกอบด้วยโปรตีนหน่วยย่อย ได้แก่ แถบโปรตีน A(16 และ 18kDa) แถบโปรตีน B(14, 16 และ 18 kDa) และ แถบโปรตีน C(14 kDa) เมื่อทำการตัดแถบโปรตีนจากเจลของโปรตีนในแต่ละส่วนที่สนใจแล้วนำไปผ่านกระบวนการแยกโปรตีนออกจากเจล และทำการวัดความเข้มโดยวิธี Bradford assay แล้วเจือจางให้ได้ความเข้มข้นเบื้องต้นที่ 50 และ 100 mcg/ml จากนั้นนำไปวัดประสิทธิภาพในการยับยั้งเอนไซน์ HIV-I reverse transcriptase พบว่าโปรตีนที่น้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 16 kDa ที่ความเข้มข้น 100 mcg/ml แสดงค่า HIV-1 RT inhibition ratio (%IR) สูงที่สุด คือ 68% และมีค่า IC 50 เท่ากับ 10.42 mcg/ml ส่วนสารสกัดโปรตีนที่ได้จากใบที่ไม่ได้ผ่านการแยกโดยวิธี Electrophoresis gel แบบ native gel เมื่อทำการทดสอบฤทธิ์ในการยับยั้งเอนไซน์ HIV-I reverse transcriptase ด้วยพบว่าสารสกัดหยาบที่ 10-30% ความเข้มข้น 100 mcg/ml แสดงค่า HIV-1 RT inhibition ratio (%IR) สูงที่สุด คือ 81% และมีค่า IC50 เท่ากับ 5.40 mcg/ml |
| abstract: In vitro Reverse transcriptase assay colorimetric method was used to screen and figure out for human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) revese transcriptase inhibitory effect of aqueous extract from leave and rhizome of Canna indica L. Aqueous extract of Canna indica L. rhizomes were fractionated by ammonium sulfate precipitation and purified from native polyacrylamide gel. The interesting complex purified protein bands from rhizomes were represented by protein band A(16 and 18 kDa), protein band B(14, 16 and 18 kDa) and protein band C(14 kDa). Subsequently, protein bands were eluted, diluted to be 50 and 100 mcg/ml and assayed for anti-HIV-1 revesre transcriptase activity. The protein B showed the highest HIV-1 reverse transcriptase inhibition ratio (%IR) with 68% at concentration 100 mcg/ml and showed IC50 with 10.42 mcg/ml. For leave extract, proteins extract of Canna indica L. leave were fractionated by ammonium sulfate precipitation, diluted to be 50 and 100 mcg/ml and assayed for anti-HIV-1 revesre transcriptase activity sequentially. The crude protein fraction at 10-30% showed the highest anti-HIV-1 revesre transcriptase inhibition ratio (%IR) with 81% at concentration 100 mcg/ml and showed IC50 with 5.40 mcg/ml. |
| . |