การพัฒนาการตรวจสอบสารเครื่องหมายมะเร็งโดยวิธีทางอิมมูโนวิทยา |
| โดย: ณัฐวุฒิ เจริญไชย,นวมินทร์ อู่ภิรมย์ ปีการศึกษา: 2539 กลุ่มที่: 4 อาจารย์ที่ปรึกษา: ปริ่มเฉนียน มุ่งการดี ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: , |
| บทคัดย่อ: ปัจจุบันพบว่าโรคมะเร็งเป็นปัญหาสุขภาพที่สำคัญยิ่งเนื่องจากที่ทำให้ผู้ป่วยจำนวนมากต้องเสียชีวิตลง สาเหตุสำคัญส่วนหนึ่งคือผู้ป่วยเข้ารับการรักษาเมื่อมีอาการของโรคมากแล้วทำให้การรักษาไม่ได้ผล แต่หากสามารถตรวจพบการเป็นโรคได้ตั้งแต่ระยะต้นๆได้ก็จะสามารถรักษามะเร็งหลายชนิดให้หายขาดหรือยืดชีวิตผู้ป่วยได้นานขึ้น ปัจจุบันได้มีวิธีที่ช่วยตรวจวินิจฉัย โดยตรวจสารที่หลั่งมาในซีรัมและสามารถตรวจพบการเป็นมะเร็งชนิดต่างๆได้อย่างแม่นยำ เรียกสารนี้ว่าเครื่องหมายก่อมะเร็ง (Tumor markers) ซึ่งนักวิทยาศาสตร์พยายามศึกษาหาเครื่องหมายก่อมะเร็งที่เป็นนอุดมคติ คือสามารถตรวจพบโรคได้ก่อนที่จะเริ่มมีอาการหรือตอนระยะเริ่มต้นของอาการ ซึ่งจะสามรถช่วยชีวิตผู้ป่วยได้โครงการพิเศษนี้ได้ศึกษาเครื่องหมายก่อมะเร็งชื่อว่า Alpha fetoprotein (AFP) โดยวิธี Immunoassay โดยใช้เทคนิค ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) แบบ Sandwich Method โดยใช้ monoclonal antibodies (MAb) ที่ผลิตเองในประเทศที่มีความจำเพาะต่อ AFP ซึ่ง AFP นี้มีคุณสมบัติเป็น single polypeptide chain น้ำหนักโมเลกุล 69,000 dalton พบได้ปริมาณต่ำมากหรือไม่พบเลยในคนปกติ แต่จะพบปริมาณสูงในผู้ป่วยมะเร็งตับ มะเร็งอัณฑะ และมะเร็งรังไข่ เป็นต้น ดังนั้นจึงสามารถใช้ตรวจกรองหารอยโรค หรือช่วยติดตามผลการรักษาหรือการตรวจการกลับมาเป็นซ้ำของโรคได้ภายหลังการรักษาแล้ว การทดลองสามารถตรวจสาร AFP ได้โดยการแยกทดสอบกับ MAb 3 ตัว และปรับความเหมาะสมต่างๆที่ใช้ในการทดสอบนี้คือ MAb ที่เคลือบหลุมทดสอบ 1 มคก/หลุม Serum, dilution 10-3-2x10-4 50มคล/หลุม Rabbit anti AFP, dilution 4x10-3 50 มคล/หลุม Goat anti rabbit IgG Peroxidase conjugated, dilution 4x10-3 50มคล/หลุม Substrate 50 มคล/หลุม การทดลองสามารถวัดค่า AFP ในซีรัมมาตรฐานได้ ตรวจพบ AFP ในซีรัมผู้ป่วยและมีกลุ่มควบคุมที่ให้ผลถูกต้องในการตรวจสอบโดยสามารถจัดทำกราฟมาตรฐานที่ใช้ในการตรวจสอบหา AFP ได้ในอนาคต |
| abstract: Cancer is now the leading cause of health problem all over the world. The harassment cancer increase high rate of death due to late diagnosis and treatment. The earlier the disease is detected, the better the prognosis, and thus would prolong the patient’s life. At present, scientists discovered a number of substances excreted in the serum of the patients and traced to a certain type of cancers. They were called “ Tumor markers ”. The scientists have been studied and search for the ideal tumor markers, which could identify the very specific disease prior any signs and symptoms and at the very early begining stage. Thus save the patient’s life. This special project has studied the tumor marker , AFP (Alpha Fetoprotien), by immunoassay, using ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) technic in Sandwich Method. By using monoclonal antibodies (MAb), those were established specifically to AFP in Thailand. AFP is a single polypeptide chain with the molecular weight of 69,000 dalton. Traces or undetected amount are found in normal serum. On the contrary, high amount were detected in patients with cancer of liver, testis, and ovaries, Therefore, AFP is useful for the screening, duagnosis, prognosis, and monitoring of the diseases in the patients. In the experiments we found that : AFP was detected with 3 MAb , with the following suitable adjustments of the test. MAb coated well 1 microgram/well Serum dilution 10-3- 2x10-4 microlitre/well Rabbit anti AFP, dilution 4x10-3 50 microlitre/well Goat anti rabbit IgG peroxidase 50 microlitre/well conjugated , dilution 4x10-3Substrate 50 microlitre/well The result indicated that our established MAbs and method developed can detect AFP in the standard serum and patient’s sera with negative to the nornal sera. The standard curve could set up and applied tn the AFP diagnostic kit. |
| . |