การตรวจสารไฮออสซีนโดยวิธีทางอิมมิวโนวิทยา |
| โดย: บังอร ผุศรี,สุวันดี เงาอร่าม ปีการศึกษา: 2538 กลุ่มที่: 4 อาจารย์ที่ปรึกษา: ปริ่มเฉนียน มุ่งการดี , อ้อมบุญ วัลลิสุต ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: , |
| บทคัดย่อ: โครงการพิเศษนี้เพื่อศึกษาเทคนิกในการตรวจสอบสารไฮออสซีน ซึ่งเป็นสารกลุ่มanticholinergic มีประโยชน์ทางการแพทย์คือจะให้แก่คนไข้ก่อนที่จะวางยาสลบเพื่อรับการผ่าตัด (preanesthetic medication) เพื่อลดสารหลั่งและทำให้กล้ามเนื้อเรียบของระบบทางเดินหายใจคลายตัว เทคนิกที่ศึกษาคือวิธีทางอิมมูโนวิทยาซึ่งสามารถตรวจสอบสารในปริมาณน้อยได้ ได้แก่ ELISA และ Dot Blot ELISA โดยใช้แอนติบอดีต่อไฮออสซีนที่เตรียมได้จากเลือดของกระต่ายในการตรวจสอบ จากการศีกษาพบว่าวิธี ELISA สามารถตรวจค่าของสารไฮออสซีนได้อย่างชัดเจนเมื่อใช้ไฮออสซีนในการตรวจสอบ 10 ไมโครกรัมต่อตัวอย่าง ส่วน Dot Blot ELISA เมื่อใช้สารปริมาณใกล้เคียงกันไม่สามารถตรวจสอบค่าได้ ต้องใช้ไฮออสซีนที่เกิดเป็นสารเชิงซัอนกับ Bovine Serum Albumin(ฺBSA) ก่อนจึงจะตรวจวัดค่าได้ ทั้งนี้อาจเนื่องจากไฮออสซีนเป็นสารที่มีโมเลกุลขนาดเล็กมากและความสามารถในการจับกับกระดาษ nitrocellulose ได้ไม่ดีเท่าที่ควรในการศึกษานี้ได้มีการทำ inhibition test เพื่อตรวจสอบความจำเพาะเจาะจงของแอนติบอดีที่เตรียมกับสารไฮออสซีน ซึ่งพบว่าแอนติบอดีต่อไฮออสซีนที่เตรียมขึ้นจากกระต่ายสามารถทำปฏิกิริยาจำเพาะต่อไฮออสซีนได้จริงโดยปฏิกิริยาสามารถถูกยับยั้งได้โดยไฮออสซีน การศึกษานี้เป็นการศึกษาขั้นต้น ซึ่งคาดว่าจะสามารถนำไปประยุกต์ใช้วิเคราะห์หาปริมาณสารไฮออสซีนในงานด้านต่างๆ ได้แก่ งานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ หรืองานทางด้านคลินิกต่อไป |
| abstract: Hyoscine is an anticholinergic agent with central and peripheral action. Hyoscine hydrobromide is recently used as preanesthetic medication to diminish some of the side effects of the anesthetic and assist the induction process. The aim of this study is to apply the immunoassay technique, i.e., ELISA and Dot Blot ELISA for developing the test system for hyoscine. Antiserum specific to hyoscine was obtained by immunizing rabbits with hyoscine conjugated with bovine serum albumin (BSA). The antiserum used was absorbed with BSA to maintain the monospecific antibody against hyoscine. Hyoscine hydrobromide coated plate at 10 mg/well can be detected by our rabbit antiserum in ELISA. By dot blot ELISA, we cannot set the suitable system to detect this low molecular weight hyoscine hydrobromide, whereas the application with hyoscine-BSA complex can be demonstated clearly. The specific reaction of antibody to hyoscine was confirmed by inhibition test in ELISA. The rabbit antibody showed inhibi tory activity after reacting with hyoscine prior the assay. This study showed the sensitivity and specificity of the immunoassay for hyoscine by self-production antiserum. The developed technique can be applied to detect hyoscine in plant tissue culture and in patient"s sera for clinical investigation. |
| . |