การปรับปรุงวิธีการแยกดีเอเอ็นเอเพื่อใช้ในห้องปฏิบัติงาน |
| โดย: นุชจรินทร์ จักรธีรังกูร,อภินีต์ ทวีทิยานท์ ปีการศึกษา: 2542 กลุ่มที่: 3 อาจารย์ที่ปรึกษา: เบญจา อิทธิมงคล , จงรักษ์ กิตติวรการ ภาควิชา: ภาควิชาชีวเคมี Keyword: , |
| บทคัดย่อ: ในรายวิชาชีวเคมีปฏิบัติการ (ภกชค 212) นักศึกษาไม่สามารถปฏิบัติการเรื่อง “การแยกดีเอ็นเอและคุณสมบัติของดีเอ็นเอ” ได้ทันในเวลาปฏิบัติการที่กำหนด เนื่องจากนักศึกษาใช้เวลาส่วนใหญ่ในการสกัดดีเอ็นเอจากเลือดไก่ โดยเฉพาะขั้นตอนที่ใช้เอ็นไซม์โปรติเอสซึ่งมีราคาแพงและใช้เวลาถึง 40 นาที และขั้นตอนการปั่นเหวี่ยงเพื่อแยกส่วนของดีเอ็นเอในสารละลายซึ่งใช้เวลา 25 นาที จึงมีจุดประสงค์การทดลองครั้งนี้ เพื่อแก้ปัญหาดังกล่าว นอกจากนี้ยังต้องการหาเวลาเก็บเลือดที่เหมาะสมโดยไม่ทำให้ปริมาณดีเอ็นเอเปลี่ยนแปลง เพื่อความสะดวกในการเก็บ ตัวอย่างเลือด จากการทดลองพบว่า การเก็บเลือดไก่ที่ 4oซ หรือเก็บเฉพาะเม็ดเลือดที่ 0oซ เป็นเวลา 21 วัน ก็ไม่ทำให้ปริมาณดีเอ็นเอเปลี่ยนแปลงจากเดิมอย่างมีนัยสำคัญ และพบว่าแม้ไม่ใช้เอนไซม์โปรติเอสในการสกัดดีเอ็นเอ ปริมาณดีเอ็นเอที่สกัดได้มีปริมาณที่ไม่แตกต่างจากการใช้เอนไซม์อย่างมีนัยสำคัญ ส่วนเวลาในการปั่นเหวี่ยงสามารถลดลงจาก 25 นาที เหลือเพียง 10 นาที การนำผลการศึกษานี้ไปปรับปรุงใช้กับวิชาชีวเคมีปฏิบัติการจะสามารถลดค่าใช้จ่ายได้ 21% และสามารถลดเวลาที่ใช้ในการสกัดดีเอ็นเอจาก 2 ชั่วโมง เหลือเพียง 1 ชั่วโมง |
| abstract: In biochemistry laboratory course (PYBC 212), the students can not finish their experiment “Isolation and Characterization of DNA” within laboratory period. Because of the time consuming process of the DNA isolation from chicken blood, especially in the step using enzyme protease which is costly needs 40 minutes for incubation period. And also the centrifugation for separation the pellet from DNA solution which consumes 25 minutes. The aim of this project is to solve these problems for reducing time using in these two steps. The studies of storage conditions of chicken blood without effecting the yield of extracted DNA was also conducted in order to be convenient for collecting blood samples. It was found that both storing whole blood at 4oC and blood cell at 0oC within 21 days would not effect the yield of extracted DNA comparing to the control. It was also found that even without using enzyme protease, the amount of extracted DNA was non-significant different from control. And the centrifugation time may be reduced from 25 minutes to 10 minutes to separate clearly. According to the results we are able to reduce the cost of DNA extraction by 21% and the DNA extraction time from 2 to 1 hour. |
| . |