โปรตีนจากพุทธรักษาที่มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ HIV-1 reverse transcriptase |
| โดย: นางสาวปุณยนุช วงศ์พิตธินันท์, นางสาวพิชญา ทวีสุข ปีการศึกษา: 2556 กลุ่มที่: 2 อาจารย์ที่ปรึกษา: จันทร์เพ็ญ วิวัฒน์ , อาพันธ์ชนิด เทพอวยพร ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: ยับยั้งเอนไซม์ HIV-1 reverse transcriptase, พุทธรักษา, โปรตีน, Canna indica L., Anti-HIV-1 reverse transcriptase, Canna indica L., Protein |
| บทคัดย่อ: การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ HIV-1 reverse transcriptase ของโปรตีนจากเหง้าพุทธรักษา (Canna indica L.) ในหลอดทดลอง โดยใช้วิธี Colorimetric assay เมื่อนาสารสกัดหยาบจากส่วนเหง้าพุทธรักษาที่ตกตะกอนด้วย 80% แอมโมเนียมซัลเฟต มาผ่านการแยกด้วย Native-PAGE มีแถบโปรตีนที่สนใจ 3 แถบ ได้แก่ แถบโปรตีน A, B และ C ทาการตัดแถบโปรตีนที่สนใจจากเจลแล้วนาไปผ่านกระบวนการแยกโปรตีนออกจากเจล วิเคราะห์น้าหนักโมเลกุลของแถบโปรตีน A, B และ C ด้วย SDS-PAGE ได้ 16.5 และ 30.5 kDa, 17.0 และ 31.0 kDa และ 16.5 และ 30.1 kDa ตามลาดับ และได้รูปแบบโปรตีนหน่วยย่อยที่เหมือนกัน โปรตีนที่ผ่านกระบวนการแยก นามาวัดความเข้มข้นโดยวิธี Bradford assay แล้วเจือจางให้ได้ความเข้มข้นที่ 100 μg/ml พบว่ามีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ reverse transcriptase โดย A, B และ C ให้เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง (%IR) เฉลี่ยเท่ากับ 49.3%, 69.1% และ 15.3% ตามลาดับ ส่วนสารสกัดหยาบ 80% แอมโมเนียมซัลเฟต ความเข้มข้น 100 μg/ml ให้ %IR เท่ากับ 50.7% จากการวิเคราะห์น้าหนักโมเลกุลและเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเอนไซม์ แสดงให้เห็นว่าโปรตีนเชิงซ้อนจากทั้ง 3 แถบนั้นประกอบด้วยโปรตีนหน่วยย่อยหลักเดียวกัน คือมีน้าหนักโมเลกุล 16.5 และ 30.1 kDa แต่ในปริมาณที่ต่างกัน จึงมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง reverse transcriptase ไม่เท่ากัน โดยแถบโปรตีน B มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ดีที่สุด |
| abstract: The objective of this study was to test the in vitro anti-HIV-1 reverse transcriptase of Canna indica L. rhizomes by colorimetric assay. 80% ammonium sulfate precipitation fraction proteins of Canna indica L. rhizomes were separated by native-PAGE and it showed three interesting protein bands namely A, B and C. Then the protein bands were cut and eluted from gel. The molecular weight of protein band A, B and C analyzed by SDS-PAGE were 16.5 and 30.5 kDa, 17.0 and 31.0 kDa, and 16.5 and 30.1 kDa, respectively with the same pattern of protein monomers. The eluted proteins were determined their concentrations by Bradford method and then they were diluted to the concentrations as 100 μg/ml. The result showed the inhibition ratio (%IR) as followed; protein band A was 49.3%, B was 69.1% and C was 15.3%. Furthermore, the %IR of 80% ammonium sulfate precipitation fraction at 100 μg/ml was 50.7%. The analysis of molecular weight and the inhibition ratio illustrated that the complex proteins from three protein bands were consisted of the same monomers, with molecular weight of 16.5 and 30.1 kDa. The different composition of protein monomers lead to the different inhibition ratio, while the protein band B has the highest inhibition ratio. |
| . |