การเตรียมDNA Probe สำหรับตรวจหาเชื้อ Pseudomonas aeruginosa ในเภสัชผลิตภัณฑ์ |
| โดย: วิทยา เล่าเรียนดี,สุธิดา คีรีทวีป ปีการศึกษา: 2537 กลุ่มที่: 2 อาจารย์ที่ปรึกษา: จันทร์เพ็ญ วิวัฒน์ ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: , |
| บทคัดย่อ: เนื่องจากปัจจุบันได้มีการนำเทคโนโลยีทางด้านอณูพันธุศาสตร์มาใช้กันอย่างแพร่หลาย ทั้งทางด้านการผลิตเภสัชภัรฑ์ เช่น การผลิตวัคซีน และฮอร์โมนชนิดต่างๆรวมทั้งไนการจำแนกชนิดของเชื้อจุลินทรีย์ และตรวจสอบเชื้อจุลินทรีย์ที่ก่อเกิดโรคเพื่อช่วยในการวินิจฉัยโรค โดยใช้ DNA probe เป้นต้น การทดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อเตรียม DNA probe สำหรับตรวจสอบหาเชื้อ Pseudomonas aeruginosa ใช้ตรวจสอบการปนเปื้อนของเชื้อชนิดนี้ในเภสัชภัณ์ โดยนำ P.aeruginosa สายพันธ์มาตรฐาน มาสกัดแยกเอา chromosomal DNA แล้วตัดด้วยเอนไซม์จำเพาะ ( restriction enzyme ) ให้ได้ชิ้นส่วน DNA ขนาด 3-20kb แล้วนำไปเชื่อมกับ plasmid vector pBlue Script KS II ที่ถูกตัดแล้ว โอยใช้เอนไซม์ T4 DNA ligase จากนั้นนำ recombinant plasmids เป็น DNA library คัดเลือกแ clones โดยอาคัยคุณสมบัติการดื้อยาปฏิชีวะนะ และหลักการ Blue-White selection บน L ฟเฟพ ผสม ampicillin 100 ug/ml และ x-gal ได้จำนวน 140 clones ซึ่งน่าจะทำการ screen ดูว่า clone ใดใน DNA library ของเราที่มีความสามารถจักกับ genomic DNA ของ P.aeruginosa ได้ดี เพื่อทำการคัดเลือก clone เหล่านี้ เพื่อนำไปพัฒนาให่ได้เป็น DNA probe ที่มีประสิทธิภาพสูงในการตรวจสอบเชื้อ P.aeruginosa ต่อไป |
| abstract: In present, various technologies in Molecular Biology have been used widely in many applications, not only inmanufacturing of some pharmaceutical product such as hormones and vaccine, but also in identification of pathogen by using a DNA probe.The objective of this special project is to produce a DNA probe for detection of P. aeruginosa in pharmaceutical product. The first step of this experiment process was extraction and purification of P. aeruginosa’s genomic DNA. Subsequently, DNA were partially digested by restriction enzyme to generate numerous DNA fragments at appropiate size (approximately 3-20 kb. The further step was to set up ligation reactions between DNA fragments and plasmid vector, pBlue Script KS II, which had already been cut, in presenting of enzyme T4 DNA ligase. The recombinant plasmids were transformed into E. coli DH 5 alfa. After that 140 colonies of the transformants which were grown on LB agar containing Ampicillin and X-gal were selected by using their antibiotic resistance activity and Blue-White selection principle. The transformants were picked and transfered to LB agar containing tetracycline/or chloramphenicol for detection their drug resistant properties. It appeared to be that nine clones resisted to chloramphenicol, nine clones resist to tetracycline Nine clones were picked at random to extract plasmid DNA and demonstrated the recombinant DNA by agarose gel electrophoresis |
| . |