การตรวจหายีน blaOXA ระดับโมเลกุล ในเชื้อ เอสเชอริเชีย โคไล ที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้าง |
| โดย: นางสาวพัชรา คุณากรธารงรักษ์, นางสาวอคิราภ์ วีรภัทรสกุล ปีการศึกษา: 2559 กลุ่มที่: 1 อาจารย์ที่ปรึกษา: มัลลิกา ชมนาวัง ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: เอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้าง, เอสเชอริเชีย โคไล, ยีน blaOXA, extended spectrum β-lactamases (ESBLs), Escherichia coli, blaOXA gene |
| บทคัดย่อ: อัตราการดื้อยาปฏิชีวนะของเชื้อ เอสเชอริเชีย โคไล ที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้าง มีอัตราการดื้อยาเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วทั่วโลก โครงการพิเศษนี้จัดทาขึ้นเพื่อศึกษา ความชุกของยีนดื้อยา blaOXA ในเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล ที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออก-ฤทธิ์กว้างในประเทศไทย โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบให้มีความจาเพาะเจาะจงกับยีน โดยตัวอย่างเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล ที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้าง 285 ตัวอย่าง แยกได้จากสิ่งส่งตรวจของผู้ป่วยติดเชื้อ จากโรงพยาบาล 5 แห่งตามภูมิภาคต่างๆ ของประเทศไทย ระหว่างเดือนมิถุนายน พ.ศ.2557 ถึงเดือนมิถุนายน พ.ศ. 2558 โดยนามาคัดกรองเชื้อที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้าง ด้วยวิธี disk diffusion และทดสอบทางฟีโนไทป์ด้วยวิธี double disk ตามที่ Clinical and Laboratory Standards Institute 2016 (CLSI) แนะนา จากนั้นนามาทดสอบการปรากฏของยีน blaOXA ของ OXA cluster 2 และ 10 ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส โดยใช้ไพรเมอร์ที่มีความจาเพาะเจาะจงกับยีน และตรวจสอบลาดับเบสเทียบกับฐานข้อมูลของยีนที่เคยมีรายงานมาก่อนหน้า ซึ่งจากการทดลองพบความชุกของยีน blaOXA อยู่ในอัตราที่ต่ามาก คิดเป็นร้อยละ 0.35 โดยพบยีน blaOXA จานวน 1 ตัวอย่าง จากโรงพยาบาลในภาคกลาง ซึ่งเป็นชนิด OXA cluster 10 และไม่พบตัวอย่างที่มียีนชนิด OXA cluster 2 จากนั้นมีการส่งยืนยันลาดับเบสพบว่าเป็นยีน blaOXA-10 จากข้อมูลเป็นการยืนยันได้ว่ายีน blaOXA มีการแพร่กระจายน้อยในเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล ที่สร้างเอนไซม์เบต้า-แลคแตมเมส ชนิดออกฤทธิ์กว้างในประเทศไทย ซึ่งในปัจจุบันมีรายงานการศึกษายีน blaOXA ในเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล อยู่น้อยมาก แต่อย่างไรก็ตามในการศึกษานี้แสดงให้เห็นการปรากฏของยีนชนิด OXA จึงควรมีการศึกษายีนชนิดนี้ในอนาคตต่อไป |
| abstract: Extended spectrum β - lactamases (ESBLs) - producing Escherichia coli are increasing rapidly and bringing a serious threat to currently available antibiotics worldwide. This study was aimed to investigate the prevalence of blaOXA genes in of ESBLs-producing E. coli in Thailand with the specifically designed PCR primers. A total of 285 isolates of ESBLs-producing E. coli obtained from five regions in Thailand from June 2014 to June 2015. ESBLs production of these isolates were examined by disk diffusion method. Phenotypic confirmation was performed by double disk test recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute 2016 (CLSI). Molecular detection of 2 types of blaOXA genes (OXA cluster 2 and 10) was performed using polymerase chain reaction (PCR) technique with specific primers for each gene and was confirmed by DNA sequencing. The results showed that the prevalence of blaOXA gene was very low rate at about 0.35%. The OXA cluster 10 was found on a single isolate from the central region and none of isolates were positive for OXA cluster 2. DNA sequencing provided the confirmatory data that the PCR product was blaOXA-10 gene. This data confirmed that there are currently very few epidemiologic data on the geographical spread of OXA-type ESBLs in E. coli in Thailand. Nonetheless, the result of this study showed existed OXA-type ESBLs in Thailand which could be closely observed in the future. |
| . |