การศึกษาไซคลินยีนจากเซลล์มะเร็ง |
| โดย: พรยุพา ธัญภัทรกุล ปีการศึกษา: 2548 กลุ่มที่: 1 อาจารย์ที่ปรึกษา: จันทร์เพ็ญ วิวัฒน์ , พรทิพา พิชา ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: ไซคลินดี1,ไซคลินดี2,วัฏจักรเซลล์,เซลล์มะเร็ง, cyclin D1, cyclin E2, cell cycle, cancer cell |
| บทคัดย่อ: ยีนไซคลินเป็นยีนที่สร้างโปรตีนไซคลิน ซึ่งมีความสำคัญในการควบคุมวัฏจักรเซลล์ ในการศึกษาครั้งนี้ผู้ทดลองได้มุ่งเน้นไปที่สับไทป์ไซคลินดี 1 และ ไซคลินอี 2 ซึ่งการแสดงออกที่มากผิดปกติของยีนทั้งสองนี้มีความสัมพันธ์กับการเกิดและพัฒนาการของเซลล์มะเร็ง ผู้ทดลองได้ทำการสกัดแยกอาร์เอ็นเอทั้งหมดจากเซลล์มะเร็ง 3 ชนิด ได้แก่ MCF-7, HeLa, และ KB จากนั้นได้ทำการเพิ่มจำนวนชิ้นส่วนยีนโดยวิธีการปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรสแบบย้อนกลับ เพื่อให้ได้ยีนไซคลินดี 1 และ ไซคลินอี 2 โดยใช้โอลิโกนิวคลีโอไทด์ไพร์เมอร์ที่จำเพาะ ผลผลิตดีเอ็นเอคู่สมที่ได้มีจำนวนเบสประมาณ 200 คู่เบส ซึ่งสอดคล้องกับไซคลินดี 1 ทีได้มีรายงานไว้แล้ว แต่ไม่สามารถเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอคู่สมของไซคลินอี 2 ได้ ผลผลิตจากปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรสของไซคลินดี 1 ถูกนำมาโคลนเข้าเวคเตอร์ pGEM®T-easy และทรานฟอร์มเข้าสู่เซลล์ E.coli DH5α แล้วทำการคัดเลือกบนอาหารเลี้ยงเชื้อ LB ที่ผสมยาปฏิชีวนะ ampicillin 100 μl/ml, X-Gal 20 μl/plate และ IPTG 50 μl/plate จากนั้นทำการแยกพลาสมิดลูกผสมทีได้และทำให้บริสุทธิ์ แล้วทำการหาลำดับเบสของดีเอ็นเอคู่สมที่ได้และเปรียบเทียบกับลำดับเบสของดีเอ็นเอของไซคลินดี 1 จากแหล่งอื่นๆที่มีรายงานไว้ พบว่ามีความเหมือนกันร้อยละ 52.63 % |
| abstract: Cyclin is a family of regulatory protein that controls mammalian cell cycle. In this study we focused on 2 subtypes of cyclin family, cyclin D1 and cyclin E2. Overexpression of either cyclin D1 or E2 is correlated with the development and progression of cancer. Total RNA was isolated from 3 cancer cell lines MCF-7, HeLa and KB. The cyclinD1 and E2 coding sequence were reverse transcribed and amplified with specific oligonucleotide primers. We could obtain approximately 200 base-pair cDNA, corresponded to cyclin D1 which was previously reported. But the attempt to amplify cyclin E2 cDNA was not success. PCR product of cyclin D1 was cloned into pGEM®-Teasy plasmid vector, and transformed into E.coli DH5α. The transformants were selected on LB agar containing 100 μl/ml ampicillin, X-Gal 20 μl/plate and IPTG 50 μl/plate. Subsequently, the recombinant plasmids were isolated, purified and subjected to sequence by automatic sequencer. The nucleotide sequence was compared with cyclinD1 from other sources. The results showed only 52.63 % homology. |
| . |