การตรวจหา Bacillus cereus ที่ปนเปื้อนในอาหารโดยวิธีปฏิกิริยา ลูกโซ่ โพลีเมอเรส |
| โดย: นส.สุพัตรา แซ่ตั้ง,นส.อรนุช ทองอุไร
ปีการศึกษา: 2546 กลุ่มที่: 20 อาจารย์ที่ปรึกษา: จันทร์เพ็ญ วิวัฒน์ ภาควิชา: ภาควิชาจุลชีววิทยา Keyword: Bacillus cereus, ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส, nheA, การควบคุมคุณภาพนม , Bacillus cereus, Polymerase chain reaction, nheA, Quality control of milk |
| บทคัดย่อ: Polymerase chain reaction (PCR) เป็นเทคนิคที่ใช้เพิ่มปริมาณยีนจาก DNA อย่างแพร่หลาย โดย primers ที่ใช้มีความจำเพาะสามารถเพิ่มปริมาณ nheA (non hemolytic enterotoxin) gene ได้ ซึ่งมีความสามารถตรวจหา Bacillus cereus ได้ถึงร้อยละ98 ของ B. cereus ที่แยกได้จากอาหาร วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อตรวจหา B. cereus ที่ปนเปื้อนในอาหารโดยใช้primers nheA คือ forward primer: TACGCTAAGGAGGGGCA, reverse primer: GTTTTTATTGCTTCATCGGCT B. cereus เป็นเชื้อที่รู้จักกันดีว่าทำให้เกิดอาการอาหารเป็นพิษ และพบว่าเป็นปัญหาเพิ่มขึ้นในอุตสาหกรรมนม อาการที่ทำให้อาหารเป็นพิษมีอยู่ 2 ลักษณะ คือ ทำให้เกิดอาการท้องเสีย และอาเจียน การเกิดพิษส่วนใหญ่ไม่รุนแรง แต่พบรายงานการเสียชีวิตจากเชื้อ B. cereus การเกิดอาการที่ก่อโรคจากการได้รับเชื้อเริ่มตั้งแต่ 105 cells/g วิธีการหา B. cereus โดยวิธีทางจุลชีววิทยา เช่น การเกิดบริเวณตกตะกอนบน Mannitol-yolk-polymyxin (MYP) ใช้เวลาอย่างน้อย 4 วัน และการใช้เทคนิค immunoblot ซึ่งใช้เวลาในการวิเคราะห์อย่างน้อย 2 วัน PCR เป็นวิธีที่มีความไวสูง และรวดเร็วจึงถูกนำไปใช้ในงานต่างๆ ซึ่งการศึกษานี้ใช้ระยะเวลาภายใน 1 วัน ในการนำวิธี PCR มาตรวจหา B. cereus ในนม, อาหารปรุงสำเร็ที่เย็นแล้ว และผักสด (นม 19 ตัวอย่าง, อาหารปรุงสำเร็จที่เย็นแล้ว 8 ตัวอย่าง และผักสด 5 ตัวอย่าง) พบ B. cereus ในอาหาร 2 ตัวอย่าง (ร้อยละ 5.9) ที่มีขนาดของ PCR product 499 bp อย่างไรก็ตามวิธี PCR สามารถตรวจหา B. cereus ที่ปนเปื้อนในอาหารได้ตั้งแต่ 104 cells/ml ซึ่งน้อยกว่าปริมาณที่ทำให้ก่อโรค ดังนั้นถ้ามี B. cereus ในอาหารปริมาณน้อยจะไม่สามารถตรวจพบ อาจนำไปเพาะเลี้ยงเชื้อก่อนที่จะทำ PCR |
| abstract: The polymerase chain reaction (PCR) technique is widely used for amplification of DNA. The specific primers could be used to amplify 98 percent of nheA (non-hemolytic enterotoxin) gene of Bacillus cereus. The purpose of this study was to detect B. cereus contaminating in foods using PCR primers of nheA; Forward primer: TACGCTAAGGAGGGGCA, Reverse primer: GTTTTTATTGCTTCATCGGCT. B. cereus is well recognised as a food poisoning organism and increasing problem for dairy industry. There are two distinct types that devided according to their symptoms, the diarrhoeal and emetic types. The posioning is usually mild, intoxications have caused deaths. The initial infective dose is 105 B. cereus cell/g. The microbiological method is confirmatory testing up to 4 days for detection of zone of precipitation on Mannitol – yolk – polymyxin (MYP). The immunoblot technique, the analysis takes at least 2 days to perform. This study used PCR for detecting B. cereus within a day. The PCR has been used in many systems due to unique sensitivity, rapid and reliable method for detecting B. cereus. The developed method has been used to detect B. cereus in commercial milks, cooked foods, and vegetables (19 of milks, 8 of cooked foods and 5 of vegetables). Two food samples (5.9 percent) were found PCR product of 499 bp. However, our PCR protocol could detect B. cereus at initial concentration 104 cell/ ml (less than infective dose). Therefore, if the numbers of B. cereus in food are lower, it can not detect. Hence, pre-enrichment of food samples may be performed before amplification. |
| . |